Kuinka välttää yleisiä väärinkäsityksiä matalalla sitovien pipettivinkkien käytössä?

Matala sitova pipettivinkit Voi vähentää merkittävästi näytetähteitä niiden hydrofobisen sisäpinnan suunnittelun vuoksi, ja ne ovat erityisen sopivia kalliiden reagenssien, viskoosisten nesteiden tai hivenaiheiden (kuten proteiinien ja nukleiinihappojen) käsittelemiseen. Jos niitä ei kuitenkaan käytetä kunnolla, ne voivat silti vaikuttaa kokeen tarkkuuteen ja toistettavuuteen. Seuraava on analyysi yleisistä virheistä ja käytössä olevista ratkaisuista yhdessä laboratorion toiminta -eritelmien kanssa:

Väärinkäsitys 1: Kärjen ennakkomatkan sivuuttaminen

Väärä toimenpide: imee näytteessä suoraan ja jätä esikäsittelyvaihe.

Vaikutus: Vaikka matalalla sitovat pipettivinkit voivat vähentää tähteitä, näytteille, kuten seerumille, proteiinille tai orgaanisille liuottimille, niiden sisäseinät voivat silti muodostaa mikro-nestekalvon pintajännityksen vuoksi, mikä johtaa alhaiseen alkuperäiseen pipetointitilavuuteen.

Oikea lähestymistapa: Toista ennen muodollista pipetointia aspiraatiohäviö 2-3 kertaa samalla näytteellä muodostaen stabiilin nestekalokerroksen kärjen sisäseinälle (paitsi korkean lämpötilan/matalan lämpötilan nesteet).

Väärinkäsitys 2: Aspiraation nopeus on liian nopea tai kulma kallistuu

Väärä toiminta: Aspiroi neste nopeasti tai pipetti kallistuu yli 20 °.
Vaikutus:

Pipetti liian nopeasti: kuplat tai selkäten imu (neste ryntää pipektiin ja saastuttaa mäntä);
Pipetti kallistettu: muuttaa nestemäistä pintapainetta, mikä johtaa epätarkkoun pipetointitilavuuteen ja lisääntyneeseen jäännöstilavuuteen. Oikea lähestymistapa:
Pipetti hitaasti ja vapauta hitaasti: toimi vakiona nopeudella ja hallitse männän vapautumisnopeutta;
Pidä pystysuunnassa: Pidä kallistuskulma ≤20 °, kun pipetin kärki upotetaan nesteen pintaan.
Väärinkäsitys 3: Viskoosisten nesteiden operatiivisten erojen huomioimatta jättäminen
Väärä toimenpide: Käytä samaa pipotingnopeutta kuin tavalliset nesteet korkean viskositeettinäytteille (kuten glyseroli- ja solususpensiot).
Vaikutus: Viskoosiset nesteet virtaavat hitaasti pipetin kärjen sisäseinään, ja nopea purkaus aiheuttaa huomattavasti jäännöstilavuuden lisääntymistä, mikä korvaa alhaisen adsorptiosuunnitelman edut.
Oikea lähestymistapa:

Pidennä upotusaika: Pysy nestemäisessä pinnassa yhden sekunnin ajan pyrkimyksen jälkeen ennen sen poistamista ja tauko 1 sekunnin ajan ennen toista vaihdetta painaa nesteen puhaltamiseksi purkautuessa;
Valitse leveä suun pipetin kärki: Käytä makromolekyylejä tai solunäytteitä leveä suuhun matala-adsorptiopipetin kärki (70% suurempi kuin tavallinen aukko) leikkausvoiman vähentämiseksi.
Väärinkäsitys 4: Kärjen asentamisessa kovaa lyömistä
Väärä toimenpide: Pipetet -kahvan toistuva lyöminen "kiristä" kärki.
Vaikutus: Pitkän aikavälin vaikutukset käyttävät pipetin tiivistyskomponentteja, tuhoavat ilmatiiviuden ja aiheuttavat vuoto- tai tilavuusvirheen.
Oikea menetelmä: Aseta pipetti pystysuunnassa kärkeen, paina kevyesti ja kierrä hieman vasemmalle ja oikealle.

Väärinkäsitys 5: Väärä tallennustila tai uudelleenkäyttö
Väärä toiminta:

Laita pipetti tasainen, kun kärjessä on jäännösneste;
Käytä kertakäyttöisiä alhaisen adsorptiovinkkejä kustannusten säästämiseksi. Vaikutus:
Litteän nesteen takaisinvirtauksen asettaminen syömään männän jousta;
Uudelleenkäyttö voi vaikuttaa ristiin saastumisen tai rakenteellisen muodonmuutoksen vuoksi. Oikea menetelmä:
Hävitä kärki heti pipetoinnin jälkeen ja ripusta pipetti pystysuunnassa;
Uudelleenkäyttö on ehdottomasti kielletty, varsinkin kun kyse on herkistä kokeista, kuten PCR: stä ja isotooppeista.
Ammatillinen neuvo: Maksimoi matalan säilyttämisvinkkien edut
Vastaa nesteiden ominaisuuksia:
Haihtuvat nesteet (kuten kloroformi): Vältä tavanomaisten matalan pidätysvinkkien käyttöä ja käytä liuotin-turvallisia kärkeä tai ulkoisia mäntäpipettejä, jotka on suunniteltu haihtuville reagensseille.
Kalibroinnin varmennus:
Punnitaan säännöllisesti analyyttisen tasapainon pipetoidun puhtaan veden paino (1 ml = 0,9982 g 20 ℃: llä) varmistaaksesi, täyttääkö todellinen tilavuus standardia.
Avainpisteiden yhteenveto: Matalan säilyttämisvinkit parantavat tarkkuutta vähentämällä näytteen menetystä, mutta jos operaation yksityiskohdat jätetään huomioimatta, se voi silti olla haitallista. Standardoitu asennus, nopeudenhallinta, sopeutuminen näytteen ominaisuuksiin ja tiukka kertaluonteinen käyttö ovat perustana korkeiden toistettavuuskokeiden saavuttamiselle.